常用培养基的制备及注意事项一、实验目的了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；了解常见灭菌、清毒基本原理及方法；掌握干热天菌、高压蒸汽灭菌及过滤除菌的操作方法。二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用较普遍和较普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的较基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。干热天菌、高压蒸汽灭菌方法主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。培养基成份的混合与溶化：培养基所用化学药品均应是化学纯的。天津自动培养基制备器

干粉培养基有哪些注意事项：①熔化培养基制备必须在玻璃容器中进行，如果使用铜或铁器皿，会影响细菌的生长。②注意按照先加水再加颗粒干粉培养基顺序，反之则不利于培养基溶解。③单在必要时进行加热溶解操作，其加热温度也不要过高时间不要过长，主要原因是高温会破坏琼脂和培养基中的一些营养成分。④生产的干粉培养基和颗粒培养基都经过pH校准，使用时无需特殊验证。因为高压会影响pH值，则应在高压后验证pH值。⑤液体培养基通常是预先包装好的，分装时应注意每管的用量不得高于试管的三分之二。⑥高压后冷却至五六十度环境，再导入平板，否则会形成更多的水蒸气，导致细菌分离数量。中国台湾自动培养基制备器培养基制备器勿将血清置于37℃太久。若在37℃放置太久，血清会变得混浊。

在制备培养基时，通常要考虑以下因素：(1)pH值多数细胞系在pH=7.4下生长得很好。尽管各细胞株之间细胞生长*pH值变化很小，但一些正常的成纤维细胞系以pH=7.4～7.7，转化细胞以pH=7.0～7.4更合适。据报道，上皮细胞以pH=5.5合适。为确定*佳pH值，做一个简单的生长实验或特殊功能分析酚红常用作指示剂，pH=7.4呈红色，pH=7.0变橙色，pH=6.5变黄色，而pH=7.6呈红色中略带蓝色，pH=7.8呈紫色。由于对颜色的观察有很大的主观性，因而必须用无菌平衡盐溶液和同样浓度的酚红配一套标准样，放在与制备培养基相同的瓶子中。(2)缓冲能力碳算盐缓冲系统由于毒性小、成本低、对培养物有营养作用，因此比其他缓冲系统用得多。在pH值条件下的缓冲能力差。(3)渗透压多数培养细胞对渗透压有很宽的耐受范围，一般常用冰点降低或蒸汽压升高测定。如果自己配培养基，可通过测定渗透压防止称量和稀释等造成的误差。

调pH：虽然培养基中含有缓冲物质成分，能使培养基的pH尽可能的保持在要求的范围内，但是配出的培养基若不符合要求，就要进行必要的调整。如果有已校准pH计，可用pH计。如果没有，可用精密的pH试纸，再根据需要用1mol/L氢氧化钠或1mol/L盐酸（微调可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸）调制所需的pH。培养基的pH一般为7.4~7.6，也有酸性或碱性的。用氢氧化钠调整的需要高压灭菌的培养基，在调整pH时要调至高出所需0.1个~0.2个单位，因用氢氧化钠提哦啊正时，高压灭菌后，培养基大的pH要降低0.1~0.2。如培养基中含有碳酸钙成分，可不调pH。培养基制备器温度和压力严格控制锁定装载舱口和外部盖子。

培养基的灭菌：一般培养基可采用121℃高压蒸汽灭菌15分钟的方法。在各种培养基制备方法中，如无特殊规定，即可用此法灭菌。某些畏热成分，如糖类，应另行配成20%如或更高的浓液，以过滤或间歇灭菌法消毒，以后再用无菌操作技术、定量加于培养基。明胶培养基亦应用较低温度灭菌。血液、体液和物品等则应从无菌操作技术抽取和加入于经冷却约50℃左右的培养基中。琼脂斜面培养基应在灭菌后立即取出、待冷至55-60℃时，摆置成适当斜面、待其自然凝固。培养平板培养基也叫平面培养基、平皿培养基。天津自动培养基制备器

培养基的分装：培养基的分装，应按使用的目的和要求，分装于试管、烧瓶等适当容器内。天津自动培养基制备器

杀毒灭菌方式主要有三种类型：⑴高压蒸汽灭菌方式，此方法可用于大多数耐热培养基。⑵煮沸灭菌法方式：此方法可用于含有不耐高温物质的培养基。⑶过滤除菌方式：过滤除菌，采用无菌技术定量添加培养基。血液和可以用无菌技术抽取并加入冷却至约五十度的培养基中。当培养基中含有不耐热物质时可以使用此方法。培养基倒入平板：将灭菌溶化的培养基冷却至五十度后，倒入无菌干燥的培养皿中。微生物培养基制备的温度不能太高，否则培养皿内盖容易形成过多的冷凝水。天津自动培养基制备器

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